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檸檬酸合酶(CS)測試盒 常量可見分光光度法 說明 技術 文章
點擊次數:203 發布時間:2019-04-02

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檸檬酸合酶(Citrate Synthase,CS)試劑盒

商品貨號:QS1005
英文名稱:Citrate Synthase(CS)Assay Kit
別名:檸檬酸合酶試劑盒 CS Kit 檸檬酸合酶(CS)試劑盒 檸檬酸合酶(CS)測試盒,生化法試劑盒
檢測方法:常量法

 

商品貨號:商品品牌:規格基本售價選擇規格
QS1005-25管/24樣 25管/24樣¥2000.00元 
QS1005-50管/48樣 50管/48樣¥3200.00元 

測定意義:                           

CS(EC 2.3.3.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體基質中,是三羧酸循環個限速酶,是三羧酸循環主要調控位點之一。

測定原理:

CS催化乙酰CoA和草酰乙酸產生檸檬酰輔酶A,進一步水解產生檸檬酸;該反應促使無色的DTNB轉變成黃色的TNB,在 412nm處有特征吸光值。

 

貨號: QS1005-50                                          規格:50管/48樣

檸檬酸合酶(citrate synthase,CS)試劑盒說明書

分光光度法

正式測定前務必取2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。

測定意義:                          

CSEC 2.3.3.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體基質中,是三羧酸循環個限速酶,是三羧酸循環主要調控位點之一。

測定原理:

CS催化乙酰CoA和草酰乙酸產生檸檬酰輔酶A,進一步水解產生檸檬酸;該反應促使無色的DTNB轉變成黃色的TNB,在 412nm處有特征吸光值。

自備實驗用品及儀器:

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰、無水乙醇和蒸餾水

試劑組成和配制:

試劑一:液體50mL×1 瓶,-20保存;

試劑二:液體10mL×1 瓶,-20保存;

試劑三:液體1mL×1 支,-20保存;

試劑四:液體50mL×1 瓶,4保存;

試劑五:粉劑×2 支,4保存,臨用前加入800μL 無水乙醇,用不完的試劑4保存一周;

試劑六:粉劑×4 支,-20保存,臨用前加入400μL 蒸餾水,用不完的試劑仍-20保存;

試劑七:粉劑×2 支,-20保存,臨用前加入800μL 蒸餾水,用不完的試劑仍-20保存;

  •  

組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:

  1. 稱取約0.1g 組織或收集500萬細胞,加入1mL 試劑一和10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
  2. 將勻漿600g4離心5min
  3. 棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g4離心10min
  4. 上清液即胞漿提取物,可用于測定從線粒體泄漏的CS(此步可選做)。
  5. 在步驟(4)中的沉淀中加入200uL 試劑二和2uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3 秒,間隔10 秒,重復30 次),用于線粒體CS 測定。
  6.  
  1. 分光光度計預熱30min 以上,調節波長至412nm,蒸餾水調零。
  2. 將試劑四、五、六和七在37(哺乳動物)或25(其它物種)孵育5min
  3. 樣本測定

試劑名稱(μL

測定管

試劑四

780

試劑五

30

試劑六

30

樣本

30

試劑七

30

將上述試劑按順序加入1 mL 玻璃比色皿中,加試劑七的同時開始計時,在412nm 波長下記錄20 秒時的初始吸光度A1 和反應2min 后的吸光值A2,計算ΔA=A2-A1

CS 活性計算:

  1. 按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每mg 組織蛋白每分鐘催化產生1 nmol TNB 定義為一個酶活力單位。

CSnmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反總÷ε×d×109]÷(V ×Cpr) ÷T=1100×ΔA÷Cpr此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。

  1. 按樣本鮮重計算:

單位的定義:每g 組織每分鐘催化產生1 nmol TNB 定義為一個酶活力單位。

CSnmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷ε×d×109W× V ÷V 樣總)÷T=222.2×ΔA÷W

  1. 按細菌或細胞密度計算:

單位的定義:每1 萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1 nmol TNB 定義為一個酶活力單位。

CSnmol/min /104 cell=[ΔA×V 反總÷ε×d×109500×V ÷V 樣總)÷T=0.4444×ΔA

V 反總:反應體系總體積,9×10-4 LεTNB 摩爾消光系數,1.36×104 L / mol /cmd:比色皿光徑,1cmV 樣:加入樣本體積,0.03 mLV 樣總:加入提取液體積,0.202 mLT:反應時間,2 minCpr:樣本蛋白質濃度,mg/mLW:樣本質量,g500:細胞或細菌總數,500 萬。

 

輔酶Ⅰ系列    
QS1000輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒可見分光光度法50管/24樣500
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MS1002NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測試盒微量法100管/96樣550
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MS1008單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒微量法100管/96樣1550
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MS1009乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒微量法100管/96樣800
QS1010NAD激酶(NADK)測試盒可見分光光度法50管/48樣600
MS1010NAD激酶(NADK)測試盒微量法100管/48樣1100
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MS1011線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測試盒   微量法100管/96樣2500
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