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CS測試盒 微量酶標儀法 說明 技術 文章
點擊次數:228 發布時間:2019-04-03

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檸檬酸合酶(Citrate Synthase,CS)活性檢測試劑盒

商品貨號:MS1005
英文名稱:Micro Citrate Synthase(CS)Assay Kit
別名:檸檬酸合酶試劑盒 CS Kit 檸檬酸合酶(CS)試劑盒 檸檬酸合酶(CS)測試盒,生化法試劑盒
檢測方法:微量法

 

商品貨號:商品品牌:規格基本售價選擇規格
MS1005 -100管/48樣索橋生物100管/48樣¥3500.00元 

 

測定意義:

CS(EC 2.3.3.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體基質中,是三羧酸循環個限速酶,是三羧酸循環主要調控位點之一。

測定原理:

CS催化乙酰CoA和草酰乙酸產生檸檬酰輔酶A,進一步水解產生檸檬酸;該反應促使無色的DTNB轉變成黃色的TNB,在 412nm處有特征吸光值。

 

 

貨號:MS1005                                                     規格:100管/96樣

檸檬酸合酶(citrate synthase,CS)試劑盒說明書

微量法

正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:                          

CS(EC 2.3.3.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體基質中,是三羧酸循環個限速酶,是三羧酸循環主要調控位點之一。

測定原理:

CS催化乙酰CoA和草酰乙酸產生檸檬酰輔酶A,進一步水解產生檸檬酸;該反應促使無色的DTNB轉變成黃色的TNB,在 412nm處有特征吸光值。

自備實驗用品及儀器:

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、無水乙醇和蒸餾水

試劑組成和配制:

試劑一:液體100mL×1瓶,-20℃保存;

試劑二:液體20mL×1瓶,-20℃保存;

試劑三:液體1.5mL×1支,-20℃保存;

試劑四:液體28mL×1瓶,4℃保存;

試劑五:粉劑×1瓶,4℃保存;

試劑六:粉劑×1支,-20℃保存,臨用前加入1.2mL蒸餾水,用不完的試劑仍-20℃保存;

樣本的前處理:

組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:

  • 稱取約0.1g組織或收集500萬細胞,加入1mL試劑一和10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
  • 將勻漿600g,4℃離心5min。
  • 棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心10min。
  • 上清液即胞漿提取物,可用于測定從線粒體泄漏的CS(此步可選做)。
  • 在步驟④的沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3秒,間隔10秒,重復30次),用于線粒體CS測定。

測定步驟:

1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至412nm,蒸餾水調零。

2、樣本測定

(1)在試劑五中加入0.6mL無水乙醇和13mL試劑四,混勻,37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)孵育5min;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融;

(2)測定管:在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、220μL試劑五和10μL試劑六,混勻,37℃反應15min后立即測定吸光值A1。

(3)對照管:在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、220μL試劑四和10μL試劑六,混勻,37℃反應15min后立即測定吸光值A2。

(4)計算ΔA=A1-A2,每個測定管設一個對照管。

CS活性計算:

  1. 使用微量石英比色皿測定的計算公式如下:

(1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。

CS(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=117.6×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。

(2)按樣本鮮重計算:

單位的定義:每g組織每分鐘催化產生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。

CS(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T=23.8×ΔA÷W

(3)按細菌或細胞密度計算:

單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。

CS(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.0475×ΔA

V反總:反應體系總體積,2.4×10-4 L;ε:TNB摩爾消光系數,1.36×104 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.01 mL;V樣總:加入提取液體積,0.202 mL;T:反應時間,2 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500萬。

  1. 使用96孔板測定的計算公式如下:

(1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。

CS(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=235.3×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。

(2)按樣本鮮重計算:

單位的定義:每g組織每分鐘催化產生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。

CS(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總)÷T=47.5×ΔA÷W

(3)按細菌或細胞密度計算:

單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。

CS(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.095×ΔA

V反總:反應體系總體積,2.4×10-4 L;ε:TNB摩爾消光系數,1.36×104 L / mol /cm;d:96孔板光徑,0.5cm;V樣:加入樣本體積,0.01 mL;V樣總:加入提取液體積,0.202 mL;T:反應時間,15 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500萬。

 

輔酶Ⅰ系列    
QS1000輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒可見分光光度法50管/24樣500
MS1000輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒微量法100管/48樣920
QS1001乳酸脫氫酶(LDH)測試盒可見分光光度法50管/24樣170
MS1001乳酸脫氫酶(LDH)測試盒微量法100管/48樣330
QS1002NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測試盒紫外分光光度法50管/48樣280
MS1002NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測試盒微量法100管/96樣550
QS1003NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)測試盒紫外分光光度法50管/48樣320
MS1003NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)測試盒微量法100管/96樣600
QS1004NADH氧化酶(NOX)測試盒  可見分光光度法50管/48樣450
MS1004NADH氧化酶(NOX)測試盒  微量法100管/96樣850
QS1005-50檸檬酸合酶(CS)測試盒可見分光光度法50管/48樣3200
QS1005-25檸檬酸合酶(CS)測試盒可見分光光度法25管/24樣2000
MS1005檸檬酸合酶(CS)測試盒微量法100管/48樣3500
QS1006丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒紫外分光光度法50管/48樣720
MS1006丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒微量法100管/96樣1400
QS1007醇脫氫酶(ADH)測試盒紫外分光光度法50管/48樣280
MS1007醇脫氫酶(ADH)測試盒微量法100管/96樣550
QS1008單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒紫外分光光度法50管/48樣800
MS1008單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒微量法100管/96樣1550
QS1009乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒紫外分光光度法50管/48樣420
MS1009乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒微量法100管/96樣800
QS1010NAD激酶(NADK)測試盒可見分光光度法50管/48樣600
MS1010NAD激酶(NADK)測試盒微量法100管/48樣1100
QS1011線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測試盒   紫外分光光度法25管/24樣1280
MS1011線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測試盒   微量法100管/96樣2500

 

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