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乙酰膽堿酯酶(AchE)試劑盒 說明 技術文章
點擊次數:624 發布時間:2019-06-10
  • 當前位置: 首頁 > 生理生化試劑盒 > 常量分光光度計法 > 酯酶系列 > 乙酰膽堿酯酶(acetylcholinesterase,AchE)試劑盒

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乙酰膽堿酯酶(Acetylcholinesterase,AchE)試劑盒

商品貨號:QS2000
英文名稱:Acetylcholinesterase(AchE) Assay Kit
別名:乙酰膽堿酯酶試劑盒 AchE Kit 乙酰膽堿酯酶(AchE)試劑盒 乙酰膽堿酯酶(AchE)測試盒
檢測方法:常量法

 

商品貨號:商品品牌:規格基本售價選擇規格
QS2000-50管/48樣索橋生物50管/48樣¥200.00元 

 

  • 產品詳細介紹
  •  
  • 產品說明書

 

測定意義:

AchE屬于絲氨酸水解酶,廣泛存在于各種動物組織和血清中。AchE催化乙酰膽堿(Ach)水解,在神經傳導調節中起重要作用。

測定原理:

AchE催化Ach水解生成膽堿,膽堿與二硫對硝基苯甲酸(DTNB)作用生成5-巰基-硝基苯甲酸(TNB);TNB在412nm處有吸收峰,通過測定412 nm吸光度增加速率,計算AchE活性。

 

貨號: QS2000         規格:50管/48樣

乙酰膽堿酯酶(acetylcholinesterase,AchE)試劑盒說明書

        可見分光光度法

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:

AchE 屬于絲氨酸水解酶,廣泛存在于各種動物組織和血清中。AchE 催化乙酰膽堿(Ach) 水解,在神經傳導調節中起重要作用。

測定原理:

AchE 催化 Ach 水解生成膽堿,膽堿與二硫對硝基苯甲酸(DTNB)作用生成 5-巰基-硝基苯 甲酸(TNB);TNB 在 412nm 處有吸收峰,通過測定 412 nm 吸光度增加速率,計算 AchE 活性。

自備實驗用品及儀器:

可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調式移液槍、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配制:

提取液:液體×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體×1 瓶,4℃避光保存。

試劑二:粉劑×1 瓶,4℃避光保存。臨用前加入 2.6mL 試劑一,充分震蕩溶解。

試劑三:粉劑×1 瓶,4℃保存。臨用前加入 2.6mL 試劑一,充分震蕩溶解。

粗酶液提取:

1. 組織:

按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加 入 1mL 提取液)進行冰浴勻漿,8000g 4℃離心 10min,取上清液待測。

2. 細菌、真菌:

按照細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細胞加入 1mL 提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時 間 3min);然后 8000g,4℃,離心 10min,取上清置于冰上待測。

3. 血清等液體:直接測定。

測定操作:

1. 分光光度計預熱 30 min,調節波長到 412 nm,蒸餾水調零。

2. 試劑二置于 37℃水浴中預熱 30min。

3. 取 1mL 玻璃比色皿,依次加入 100μ L 上清液、800 μ L 試劑一、50μ L 試劑二和 50 μ L 試 劑三,迅速混勻,于 412nm 處測定 3min 內吸光值變化,第 10s 吸光值記為 A1,第 190s 吸光 值記為 A2。△A 測定管=A2-A1。

注意:空白管只需測定一次。

AchE 活性計算公式:

1. 組織 AchE 活性

(1)按照蛋白濃度計算 活性單位定義:每毫克蛋白每分鐘催化產生 1nmol TNB 的酶量為 1 個酶活單位。

AchE 酶活(nmol/min/mg prot)= (△A÷ε ÷d×V 反總×109 )÷(Cpr ×V 樣)÷T = 245×△A÷Cpr

(2)按照樣本質量計算

活性單位定義:每克組織每分鐘催化產生 1nmol TNB 的酶量為 1 個酶活單位。

AchE 酶活(nmol/min/g 鮮重)= (△A÷ε ÷d×V 反總×109 )÷(W ×V 樣÷V 樣總)÷T = 245×△A÷W

2. 細菌、細胞 AchE 活性

活性單位定義:每 104個細胞每分鐘催化產生 1nmol TNB 的酶量為 1 個酶活單位。

AchE 酶活(nmol/min/104 cell)= (△A÷ε ÷d×V 反總×109 )÷(細胞數量×V 樣÷V 樣總)÷T = 245×△A÷細胞數量

3. 血清 AchE 活性

活性單位定義:每毫升血清每分鐘催化產生 1nmol TNB 的酶量為 1 個酶活單位。

AchE 酶活(nmol/min /mL)= (△A÷ε ÷d×V 反總×109 )÷V 樣÷T =245×△A

ε :TNB 摩爾消光系數,13.6×103 L/mol/cm;V 反總:反應體系總體積(L),1 mL=0.001 L; 106:1mol=1×106 μ mol;V 樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:蛋白濃度(mg/mL);W:樣本 質量,g;V 樣:加入上清液體積(mL),0.1 mL;T:反應時間(min),3 min。

 

系列產品及單價

酯酶系列    
QS2000乙酰膽堿酯酶(AchE)測試盒可見分光光度法50管/48樣200
MS2000乙酰膽堿酯酶(AchE)測試盒微量法100管/96樣380
QS2001組織及血液酸性磷酸酶(ACP)測試盒可見分光光度法50管/24樣160
MS2001酸性磷酸酶(ACP)測試盒微量法100管/48樣310
QS2002組織及血液堿性磷酸酶(AKP/ALP)測試盒可見分光光度法50管/24樣160
MS2002堿性磷酸酶(AKP/ALP)測試盒微量法100管/48樣310
QS2003羧酸酯酶(CarE)測試盒可見分光光度法50管/48樣300
MS2003羧酸酯酶(CarE)測試盒微量法100管/96樣590
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