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瑞氏染液的作用與應用
點擊次數:1055 發布時間:2015-12-29

瑞氏染液的作用與應用

瑞氏染液由酸性染料伊紅和堿性染料美藍組成的復合染料,溶于甲醇,后解離為帶正電的美藍和帶負電的伊紅離子。伊紅通常為鈉鹽,有色部分為陰離子。美藍通常為氯鹽,有色部分為陽離子。甲醇的作用:一是溶解美藍和伊紅,使其解離為有色美藍正離子的和伊紅負離子。后兩者可以選擇性地吸附于血細胞內的不同成分而使其著色;二是固定細胞形態,加速染色反應,增強染色效果。

瑞氏染液染色原理:

瑞氏染色法使細胞著色既有化學親和反應,又有物理吸附作用。瑞氏染料由酸性染料伊紅和堿性染料美藍的氧化物(天青)組成,其深于甲醇后,解離為帶正電的美藍和帶負電的伊紅離子。各種細胞由于所含化學成分不同,對染料的親和力也不一樣,因此,染色后各種細胞呈現出各自的染色特點。

瑞氏染液配置方法:

瑞士染料830gm或1g;

甲醇(AR) 500ml或600ml;

先稱干燥(事先放入溫箱干燥過一夜)瑞氏染料放置乳缽內,用乳棒輕輕敲碎染料成粉末,再行研磨至聽不到研芝麻聲即呈細粉末,加少許甘油或甲醇溶解研磨,使染料在乳缸內顯“一面鏡”光澤,而無染料粉粒沉著。再加較多量甲醇研磨呈一面鏡光亮,靜置片刻,將上層液體倒入一清潔儲存瓶內(好用甲醇空瓶),再加甲醇研磨,重復數次,至乳缽內染料及甲醇用完為止,搖勻,密封瓶口。存室溫暗處,儲存愈久,則染料溶解、分解就越好,一般儲存3個月以上為佳。

瑞氏染液使用說明:

1、取涂片、自然干燥。

2、滴加瑞氏染液染3分鐘,使標本被其中甲醇所固定。

3、加等量PH6.4的磷酸鹽緩沖液(或等量超純水)輕輕晃動玻片, 與瑞氏染色液混勻,靜置5分鐘。

4、水洗、吸干、鏡檢。

5、細菌染成藍色,組織細胞胞漿紅色,細胞核藍色。

注意事項:

1、PH對細胞染色有影響。由于細胞中各種蛋白均為兩性電解質,所帶電荷隨溶液PH而定。對某一蛋白質而言,如環境PH<PI(蛋白質的等電點),則該蛋白質帶正電荷,即在酸性環境中正電荷增多,易與酸性伊紅結合,染色偏紅;相反,則易與美藍天青結合,染色偏藍。為此,應使用清潔中性的玻璃片,稀釋液必須用PH6.4~6.8的確良緩沖液。沖洗玻片必須用流水。

2、未干透的血膜不能染色,否則染色時血膜易脫落。

3、染色時間與染液濃度、染色溫度成反比;而與細胞數量成正比。

4、沖洗時不能先倒掉染液,應用流水沖去,以防染料沉淀在血膜上。

5、如血膜上有染料顆粒沉積,可加少許甲醇溶解,但需立即用水沖洗掉甲醇,以免脫色。

6、染色過淡,可以復染。復染時應先加緩沖液,創造良好的染色環境,而后加染液,或加染液與緩沖液的混合液,不可先加染液。

7、染色過深可用水沖洗或浸泡水中一定時間,也可用甲醇脫色。

8、染色偏酸或偏堿時,均應更換緩沖液再重染。

瑞氏染液為索萊寶常備貨產品,貨號為G1040。瑞氏染料是由堿性染料美藍(Methvlem blue)和酸性染料伊紅(Eostm Y)組成的復合染料,溶于甲醇 。在正常情況下,血膜外觀染成淡紫紅色。顯微鏡下,紅細胞呈粉紅色,在厚薄均勻處,略有碟狀感。白細胞漿中顆粒清楚,并顯示出各種細胞特有的色彩。細胞核染紫紅色,核染色質結構清楚。

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