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胰蛋白酶消化液配置及保存
點擊次數:854 發布時間:2016-01-29
 

胰蛋白酶消化液配置及保存

一、蛋白酶消化液配置步驟

1.D-Hanks液高壓滅菌之后,晾至室溫,4℃保存備用。

2.稱取一定量胰蛋白酶粉末于研磨器中(夏天時研磨器應放在冰浴中),加入少量D-Hanks液研磨1 000次左右,調制成糊狀。再放入4℃預冷的適量D-Hanks液中,4℃下磁力攪拌使完全溶解。

3.用NaHCO3干粉將胰酶溶液的pH值調至8.0左右(胰酶作用的適pH值),并加入0.02%EDTA以協助消化作用。

4.濾過除菌,-20℃凍存。

 

二、蛋白酶消化液配置過程中的注意事項

1.BSS的pH值應確定為7.2左右。

2.如配制的Hanks液高壓滅菌后液體變混,則可將100 mL的CaCl2與含有其他成分的液體分別裝瓶高壓滅菌之后,再在無菌條件下配制,定容。這樣可以避免高壓滅菌后液體變混。

3.胰酶受熱易失活,所以盡量避免盛夏配制,并且在配制過程中溫度應始終保持在4℃左右。

4.胰酶研磨要充分,否則在過濾時會將較大的顆粒過濾掉,不能達到真正的濃度。

5.胰酶分裝時盡量分裝成多瓶,并遵守3次左右用完和只裝2/3體積的原則。因為冷凍保存時體積會膨脹,而多次使用同一瓶胰酶反復凍融會降低消化效果并可能造成污染。

 
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