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質粒dna的提取及堿裂解法提取質粒原理
點擊次數:593 發布時間:2016-01-29
 

   質粒dna的提取及堿裂解法提取質粒原理 

    質粒dna的提取是DNA技術中的必備實驗技能。而堿裂解法是較常用的提取的方法。本文著重介紹了質粒dna提取及堿裂解法提取質粒原理。

    質粒DNA上攜帶的基因信息可經過基因表達實驗后表現出相應的性狀。質粒DNA的分離提取包括了培養細胞——收集——分離純化三大步驟。

    質粒是細胞內的一種環狀的小分子DNA,是進行DNA重組的常用載體。作為一個具有自身復制起點的復制單位獨立于細胞的主染色體之外,質粒dna上攜帶了部分的基因信息,經過基因表達后使其宿主細胞表現相應的性狀。在DNA重組中,質粒或經過改造后的質粒載體可通過連接外源基因構成重組體。

    從宿主細胞中提取質粒DNA,是DNA重組技術中基礎的實驗技能。分離質粒DNA有三個步驟:

1、培養細菌使質粒擴增

2、收集和裂解細菌

3、分離和純化質粒DNA

    堿裂解法是較常用的提取的方法。其優點是得率高,適合于大多數的和菌株,所得產物經純化后可滿足多數的DNA重組操作。堿裂解法提取質粒原理是采取酸堿度高達Ph12.6的堿溶液使DNA發生變性。由于質粒和主染色體的拓撲結構不同,變性時前者雖然兩條鏈分離,但仍然纏繞在一起不分開;而后者完全變性分,甚至出現斷裂。因此,當加入中和液時,溶液Ph值恢復較低的近中性水平,此時, 質粒的兩條小分子單鏈可迅速復性,恢復雙鏈結構,但是主染色體DNA則無法復性。在離心時,大部分主染色體與細胞碎片,雜質等纏繞一起被沉淀,而可溶性的質粒DNA留在上清夜中。

 
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